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elisa试剂盒实验前,请仔细阅读中英文说明书,我们提供免费代测,实验过程指导服务。在做ELISA实验的时候加入显色底物后,标准品有颜色,但结果分析发现标准品点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等,总结如下原因:
ELISA标准曲线点的吸光值一般在3.0以下,若太高超出仪器检测范围,显示OVER FLOW,可能原因:
1.可能原因:如OD绝对值靠谱,则显色过度
1.解决方法:TMB显色体系中建议根据S1,S2颜色进行判断,当S1,S2深蓝色,有明显梯度,S5有淡蓝色时即可终止。
2.可能原因:仅作单波长检测
2.解决方法: 由于参考波长读取非特异性检测,如指纹、划痕、水渍等,对结果也有影响。建议*终结果以双波长为*准确。
二、标准曲线点吸光值偏低
ELISA标准曲线点的吸光值一般要在0.8以上,若小于0.8,可能的原因:
1.可能原因:粉末标准品未充分溶解
1.解决方法:粉末标准品按说明书加一定体积的液体后,轻柔混匀,室温静置30分钟,充分溶解。
2.可能原因:标准品反复冻融
2.解决方法:标准品反复冻融后活性降低。
3.可能原因:孵育温度、时间
3.解决方法: 按说明书要求孵育条件进行孵育。
4.可能原因:显色时间控制
4.解决方法:TMB显色体系中建议根据S1,S2颜色进行判断,当S1,S2深蓝色,有明显梯度,S5有淡蓝色时即可终止。
三、标准曲线无梯度
ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释,但结果分析标准曲线没有梯度,可能的原因:
1.可能原因: 样品或标准品污染
1.解决方法: 避免污染
2.可能原因:错误的样品或标准品的稀释
2.解决方法: 完全按照说明书稀释
3.可能原因: 偶联抗体浓度过高
3.解决方法: 按照说明书调整到*佳的浓度
4.可能原因:TMB底物孵育时间过长
4.解决方法: 调整到合适的孵育时间
5.可能原因: 错误的孵育时间或温度
5.解决方法:完全按照说明书
6.可能原因:孵育时未加盖导致溶液挥发和污染
6.解决方法: 贴封片或加盖
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