该方法的适用条件是：含有多个抗原表位的大分子物质。因为这种检测方法需要两种抗体，所以就涉及抗体配对的问题。般而言，常用的抗体配对方法有下几种：包被抗体为单抗，检测抗体为多抗；包被抗体为单抗，检测抗体为单抗，但这两种单抗针对的抗原表位不同；包被抗体为多抗，检测抗体为多抗，这两种多抗般是来源于不同的宿主。

这种检测方法在应用酶标第二抗体时，应该注意的个原则是：第二抗体必须只能针对检测抗体，而不能针对包被抗体。鉴于酶标二抗的局限性，现在般厂家都引入生物素亲和素放大系统，这种系统在提高反应灵敏度的同时，应用起来也更加方便，我们只需要对检测抗体进行生物素标记，不需要对每种不同来源的二抗进行酶标记，只需对亲和素做HRP标记就可以省去很多繁琐的工作。

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ELISA常用检测法—双抗体夹心法原理介绍

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