联系我们/CONTACT US

联系人：钱经理

电话：13636351217

手机：13636351217，13636351073

地址：上海市松江临港科技城汉桥文化科技园B座

邮编：201615

传真：021-64881400

邮箱：2881726255@qq.com

阿仪网商铺：http://www.app17.com/c60514/

手机网站：m.shhyswkj.com

产品分类/PRODUCT CLASS

技术文章

正确配制MTT试剂的方法,你知道吗?

点击次数：2055 发布时间：2020/9/9 9:58:23

一、MTT试剂主要有两个用途：

1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培育的细胞毒性的测定；

2．细胞增殖及细胞活性测定。

二、MTT试剂原理：

检查原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT试剂还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。

三、配制方法——悬浮细胞

1.收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培育基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培育液稀释（储存液100mg/ml，需预试寻找zui佳稀释度，1:10-1:20）；③需检查物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul参入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100ml 1640）。

2.置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

3.每孔参入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培育4 h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培育4 h后可跳过步骤4，直接酶联免疫检查仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）

4.离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔参入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检查仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。

我公司主营胎牛血清、生物试剂、elisa试剂盒、培养基、对照品、标准品、抗体等，高品质为您提供gibco、hyclone、nqbb、sigma等各个品牌的血清，质量保证、价格实惠，欢迎广大客户来电咨询！