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技术文章

恒远干货分享:用BCA法测定蛋白质浓度

点击次数:881   发布时间:2020/9/16 9:15:19

1.目的

掌握BCA法测定蛋白质浓度的原理。

2.原理

BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+ 还原为Cu+ ,一个Cu+ 螯合二个BCA分子,工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物,光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

3.计算

① 绘制标准曲线。

② 以测定管吸光度值,查找标准曲线,求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。

③ 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者,求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。

4.实验器材

① 7220型分光光度计

② 恒温 水浴 箱

③ 中试管7支

④ 枪式移液管

5.试剂

①试剂A:1%BCA二钠盐;2%无水碳酸钠;0.16%酒石酸钠;0.4%氢氧化钠;0.95%碳酸氢钠;混合调PH值至11.25。

② 试剂B:4%硫酸铜。

③ BCA工作液:试剂A 100ml + 试剂B 2ml混合

④ 蛋白质标准液:用结晶牛 血清 白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定)

⑤ 待测样品:用双缩脲测定法的样品稀释而成。

6.BCA的优缺点

① 操作简单,快速,45分钟内完成测定,比经典的Lowary法快4倍且更加方便;

② 准确灵敏,试剂稳定性好,BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml,微量BCA测定范围在0.5-10μg/ml。

③ 经济实用,除 试管 外,测定可在微板孔中就进行,大大节约样品和试剂用量;

④ 抗试剂干扰能力比较强,如去垢剂,尿素等均无影响


此法测定蛋白质浓度,近些年被科研工作者广泛选用。总之,虽然蛋白质含量的测定方法很多,但是,还没有一个完美的方法。在选择测定方法时,可根据实验要求和实验室条件决定。

原创作者:上海恒远生物技术发展有限公司

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