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点击次数:11 发布时间:2024/7/4 11:28:10
做细胞培养实验经常会用到血清,血清用不完我们会冻起来下次使用。但相信大家也会发现在融化血清过程中会出现白色的沉淀物质,就会疑惑这种情况是否是血清出现问题。
??首先呢我们要搞清楚血清中絮状沉淀物是什么,沉淀物包含纤维蛋白和脂蛋白,这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1~2分钟)或简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。
(1)怎样才能降低沉淀物的发生呢?
1. 解冻血清/分装冻存时,须规则摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
2. 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
3. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要无须做此步骤。
(2)使用时常见问题及解决方法:
一、保存血清*zui好的方法
??血清应保存在-5℃至-2O℃,若存放于4℃请勿超过一个月。若无法一次用完一瓶,建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
二、如何解冻血清不会使产品质量受损
??将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
三、避免沉淀物的产生
1. 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。
2. 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生
3. 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
4. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要无须做此步骤。
5. 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
四、如何处理血清解冻后有絮状沉淀物出现
??想要去除这些絮状沉淀物,可将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞过滤膜。
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