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技术文章

ELISA试剂盒样本处理方法

点击次数:30   发布时间:2025/2/28 11:13:02

一、核心处理流程

1. 样本类型与预处理

样本类型处理方法(步骤)关键注意事项
血清 全血静置30分钟(室温),离心2000×g 10分钟(4℃),取上清免溶血;避免反复冻融(*多3次)
血浆抗凝全血(EDTA/肝素)离心3000×g 15分钟(4℃),取上层血浆抗凝剂需与试剂盒兼容(详见说明书)
细胞上清直接离心1000×g 5分钟去除细胞碎片,上清分装保存避免细胞裂解污染(可能干扰检测)
组织匀浆 组织剪碎后液氮研磨,按比例加入PBS(含蛋白酶抑制剂)匀浆,离心12000×g 20分钟取上清控制总蛋白浓度(建议1-10 mg/mL)
尿液/唾液离心2000×g 10分钟去除沉淀,上清加入0.1% BSA稳定检测前需稀释(避免高盐/酸碱干扰)

2. 保存与运输

短期保存:4℃冷藏(≤24小时),避免微生物滋生。

长-期保存:-80℃分装冻存(避免反复冻融),使用冻存管标注批次/日期。

运输:干冰(-80℃)或冷链箱(2-8℃),避免剧烈震荡。


三、质量控制要点

1.样本稀释

按试剂盒要求梯度稀释(常用稀释液:PBS+1% BSA)。

避免基质效应:高脂血/溶血样本需超速离心或过滤。


2.干扰物处理

去除内源性酶:过氧化氢酶(HRP系统)或碱性磷酸酶(AP系统)抑制剂。

去除类风湿因子:添加IgG阻断剂(针对血液样本)。


3.质控样本

阳性/阴性对照:每板至少设置2孔。

标准曲线:覆盖检测范围(建议R2≥0.99)。


三、常见问题与解决方案

问题可能原因解决方案
OD值异常高/低样本过度稀释/未稀释预实验优化稀释比例,检查标准曲线
板内重复性差离心不彻-底或气泡干扰离心后静置5分钟,加样时避免产生气泡
非特异性显色交叉反应或封闭不充分增加封闭时间(≥1小时),使用专用封闭剂

提示:不同品牌试剂盒可能存在差异,务必以说明书为准!


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