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四川师范大学汪老师与我司技术交流ELISA

点击次数：3533 发布时间：2018/8/22 11:23:33

    在本月初的时候，四川师范大学汪老师在我公司订购了两个指标的进口elisa试剂盒，昨日汪老师来电给我公司业务员，表明出：实验已经完毕，但是有一些相关实验的小困扰。对这一问题，我司业务员时间为汪老师安排到了技术部人员与其交流ELISA实验。

在这一实验过程中，为什么必须设置复孔呢？
    其实这一问题，之前也有客户问过的，为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测，因为复孔检测可以：
1. 计算平均值，确保实验结果更准确；
2. 解决实验中误操作造成的跳孔现象；
3. 计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

    汪老师还特别问道：到什么时候终止进口ELISA试剂盒实验的反应？

    我司技术人员说明出：本实验*终需要酶催化底物显色反应来完成，在*佳时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应。上海恒远技术人员说明出：“也可以根据浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止”。

酶标仪读数的时候必须选用双波长是有什么原因呢？
因为：
1. 在使用酶标仪之前务必预热10-15min，使测读结果更稳定；
2. ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰。
一般采用波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值*小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收；因此，双波长测定，可限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度。